产品货号：
HR9108
中文名称：
细胞内pH检测试剂盒(红色荧光)
英文名称：
产品规格：
50T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒采用BalBcellProbe P06细胞内pH值荧光探针检测胞内pH值的变化。BalBcellProbe P06是pH敏感的荧光染料，其在碱性条件下荧光强更高，反之酸性条件下变低，从而BalBcellProbe P06可被用于监测细胞内pH变化。
BalBcellProbe P06是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，自身身没有荧光，穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成荧光物质，从而被滞留在细胞内。产生的荧光物质最大激发波长为488nm，最大发射波长为640nm，其在不同的pH值条件下发射的荧光强度不同，从而可以反映细胞内pH值得变化情况。
BalBcellProbe P06主要用于哺乳动物细胞的研究，也可用于其他动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的细胞内pH水平检测。在有细胞内pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中也可应用。实际检测时推荐使用的激发波长为488～530nm左右，发射波长为640nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内pH值的变化。
细胞内pH（Intracellular pH，pHi）是酶活性和细胞功能的重要生理决定因素，所有蛋白质都依赖于严格调节的pH值以维持其结构和功能。质子-去质子化可以指示生物表面的电荷，并且是许多代谢反应中的组成部分。此外，跨线粒体膜的质子梯度用于产生细胞能量并支持其他线粒体过程。因此，细胞已经开发出多种机制来保持pHi的窄范围，以响应pH值的细胞内和细胞外波动。
| 组分 | 50T | 100T | 保存条件 |
| 组分A：细胞内pH荧光探针P06 | 50μL | 2×50μL | -20℃，避光 |
| 组分B：探针稀释液 | 10mL | 10mL | 2～8℃ |
保存：按标签指示条件保存，有效期6个月。
本试剂盒内P06探针母液500～5000倍稀释后使用，一般1000～2000倍稀释使用即可，按每个样500μL计算，50μL母液至少可以做100～200个样品。
| 仪器准备 | 1.流式细胞仪或激光共聚焦或荧光显微镜 2.离心机 3.移液器 4.冰箱 5.冰盒 |
| 试剂准备 | 1.PBS缓冲液 2.HBSS 3.（备选）Nigericin sodium salt(货号：HR9119） |
| 耗材准备 | 1.离心管 2.吸头 3.一次性手套 |
- 探针长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
- 探针A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
- 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
- BalBcellProbe P06探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。
- 吸取BalBcellProbe P06探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
- 未使用完的BalBcellProbe P06探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
- 试剂拆封后请尽快使用完！
- 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
- pH探针为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
- BalBcellProbe P06探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。
- 吸取BalBcellProbe P06探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
- 未使用完的BalBcellProbe P06探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
- BalBcellProbe P06探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
- 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
- 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
- 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
- 染色后立即进行分析。
- 可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127可以帮助BalBcellProbe P06更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存BalBcellProbe P06溶液。
- 本试剂盒主要用于细胞内pH值变化的定性检测。如果需要测定细胞内pH值数值，可以选择细胞内pH值检测试剂盒(货号：HR0958)。
- 染色工作液的配制：
根据样品数，用探针稀释液将P06探针进行10倍稀释，然后再用HBSS缓冲液稀释BalBcellProbe P06溶液20倍～200倍，配制成BalBcellProbe P06染色工作液。 - 将BalBcellProbe P06染色工作液加入已处理好的细胞，在37℃孵育30～60分钟。
- 用PBS或HBSS洗涤细胞2～3次。用HBSS重悬细胞。
- 然后用该细胞进行荧光细胞内pH变化情况检测。
激发波长488～530nm，发射波长640nm。
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